医学论文代写范文:某市郊区猪圆环病毒2型流行病学检查

发布时间:2017-05-15 15:35:24 论文编辑:jingju

第一章文献综述


1猪圆环病毒的特点及其危害现状
猪圆环病毒(Porcine circovirus, PCV)在动物病毒基因组中是最小的,于1982年被发现,随后在世界主要国家和地区均有发现该病毒的存在,近十年来几乎世界上所有发达国家和地区的规模化养殖场均收到该病毒的危害。根据现有的文献认为,PCV只有两个血清型(PCV1和PCV2)。血清型PCV2是致病性血清型,在临床表现型是断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome, PMWS)的主要病原…。本病主要造成猪体温升高,体重减轻,呼吸加快,腹沟淋巴结明显肿大,最终死亡。除PMWS外,在PDNS (猪皮炎与肾病综合征)、PNP (增生性坏死性肺炎)、PRDC (猪呼吸道疾病综合征)、繁殖障碍、先天性颤抖、肠炎等病猪中大多数可以分离到猪圆环病毒,被视为猪圆环病毒的主要并发症[2]。PCV2的主要危害在于会同时诱发猪的其他相关症状,引起猪机体主要结构系统的失衡,死亡率最高可达40%,最低在10%左右。如果是猪场设施落后,管理混乱的情况下暴发本病,很容易继发其它的细菌性疾病,此时最高死淘率可超过40%,这个给目前的我国乃至世界的养猪户均形成了严重困扰。PCV2整个基因组全长1766bp,基因组包含11个潜在的开放阅读框(ORFl-0RF11)。开放阅读框的大小不同,其中5 ’的0RF1和0RF5,0RF7,0RF10 ORF,3’ 的方向有 0RF2,0RF3, 0RF4,0RF6, 0RF8,两个基因 0RF11 5 “3” 在同一方向的。其中,PCV1的0RF1和0RF2,0RF3, 0RF4, 0RF7,0RF8,分别与相应的PCV2的ORF具有一定的同源性,与他们的其余部分ORFs之间没有同源性。目前0RF1、0RF2和0RF3已经证明,其中0RF1和0RF2是主要的阅读框。
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2猪圆环病毒的致病过程
致病性血清型PCV2是导致猪生长受影响的许多综合疾病的主要病原体。感染PCV2猪的机体及组织主要表现为以下症状:猪明显出现营养不良,皮肤苍白,贫血,部分出现黄疸(疑似PMWS的猪有20%出现);体内大部分淋巴结出现异常肿胀,内脏和外周淋巴结肿大到正常体积的3-4倍,切面为均勻的白色;肺部有灰褐色炎症和肿胀,呈弥漫性病变,比重增加,坚硬似橡皮样目前大多数研究学者认为,猪圆环病毒的致病机理主要在于引起猪免疫系统缺陷。PCV2能引起猪体并发多种疾病,主要在于该病毒能感染猪圆环病毒病的小肠、支气管、鼻點膜、扁桃体、肺脏、肾脏和脾脏等器官,引起猪机体的呼吸、消化、排泄等生理系统失衡。其中,感染PCV2猪的淋巴组织受损是该病毒致病的关键。多数发病猪在胸腺、脾、肠系膜、支气管等处的淋巴组织中均有该病毒,其中肺脏及淋巴结中检出率较高PCV2病毒在入侵宿主后,侵烛宿主体内淋巴细胞,导致患猪体况下降,形成免疫抑制使得机体对疾病不表现免疫或免疫微弱,从而引发其他病变同时发生。
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第二章材料与方法


1试验材料
1.1试验猪来源
本实验采用前腔静脉采血法,釆集大白猪、长白猪和杜洛克的血样。


1.2调查方法
调查福州郊区非免疫猪群的猪场及不同阶段群体PCV2的发病情况。1.3主要仪器设备、试剂及配置方法


1.3.1主要伩器设备
(1) BLOHiT移液枪
(2) epperdorf 离心机:美国 eppordorf 公司
(3) WHY-2型水浴恒温振荡器:杭州金华科学仪器厂
(4) HH-4数显恒温水浴锅:大中电器有限公司
(5) WH-966漩润混合器:江苏省高淳市生化仪器厂
(6) DSX-280B型灭菌器:湖北医疗器械厂
(7) Veriti-96孔热循环仪-梯度PCR仪:美国epperdof公司
(8) DYY-8C型电泳仪:上海八一仪器厂
(9) WD-9403F紫外仪:南京八一仪器厂
(10) LG-3型水平凝胶电泳槽:北京天根生物技术有限责任公司
(11) IOS-9001电子天平:利斯赛多科学仪器(上海)有限公司
(12) DHG-9146A型电热恒温鼓风干燥箱:浙江发发实验设备有限公司
(13) DW-40L92/188/262海尔4°C低温保存箱:青岛海尔股份有限公司
(14) ABY-2001-U型标准有机型超纯水机:ABI公司
(15) BCD-219S/L 容声冰箱
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2试验方法与步骤
按照PCV2酶免疫检测试剂盒进行,具体见下:
(1) 所有试剂在试验前应放至室温(18°C~25°C)进行孵育,同时用振荡仪让试剂缓缓旋转或振荡混匀;
(2)在稀释板上按1 : 5体积比进行待检血清稀释(30此待检血清+120 mL样品稀释液)。
(3)在96孔板的右下部分的孔里加入2孔阳性对照和2孔阴性对照原液、稀释后待检猪血清各100 mL。振荡混匀后,置湿盒中,于37°C孵育30min
(4)倒掉各孔中液体、然后在纸上拍于净。每孔加入300 mL洗漆液,静置约30 S,重复洗漆5次,最后在吸水纸上拍净;
(5)每孔加入酶结合物液100 ML,置湿盒中,于37°C解育30 min;
(6)重复步骤(4);
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第三章结果与分析........ 9
1不同养殖猪场PCVD发病情况临床诊断调查........ 9
2非免疫猪群猪血清PCV2抗体阳性率变化........ 9
3不同养殖规模猪群PCV2抗体阳性率........ 10
4不同生长时期猪群PCV2抗体阳性率 ........10
5血清与组织样品中PCV2核酸的检测........ 12
6 PCR与ELISA同步检测结果的比较........ 12
第四章讨论 ........14
1.规模养猪场PCVD临诊发病情况........ 14
2. PCV2血清学调查及分析........ 15
3.血清与组织样品中PCV2核酸的检测........ 15
第五章结论........ 17


第四章讨论


1. 规模养猪场PCVD临诊发病情况
PCVD自上世纪90年代以来已经在世界范围内流行,对不同年龄阶段、不同品种、不同生育特性的猪均能造成严重影响。近年来,本病发病率呈现逐渐下降的趋势,猪感染致病程度有一定下降,防治水平也在不断提升。但是PCV2病毒仍然是影响猪产业发展、限制猪肉品质的重要病原,长期潜伏于猪群体内,使猪群整体处于亚健康状态。PCVD是一种重要的免疫抑制性疾病,严重影响猪的自身免疫功能,降低免疫应激由于免疫抑制,病猪体免疫抑制,并诱导双重及多重感染,这是PCV造成猪疾病异常严重、导致猪死亡率提高的重要原因。因此,在临床中常见的猪群在PCV感染后,相继发生其他病原体感染而引起的其他猪类严重疾病。加之猪自身免疫系统减弱甚至全失,猪群死亡率增加,造成较大的经济损失。虽然PCVD的临床症状不断明确,诊断方式不断增加,防治措施也在逐步加强,但目前为止,大部分猪场的养殖环境及养殖技术仍然较为落后,猪群体之间的交叉感染没有得到有效的控制,养殖环境没有进行合理的安排,猪群的隔离方式也有待提高。因此,在加强该病原机理、诊断方式、治疗措施等实验性研究的基础上,加强养猪环境监控、提高养殖户养殖技术也是防范该病原爆发的重要措施。

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结论


1. 2013年度福州郊区场规模养猪PCVD临床发病率为20. 90%,随着养殖规模的增加,其中PCVD临床发病率呈下降趋势,超过500头基础母猪的猪场PCV2发病率为15%,基础母猪存栏50头的发病率最高,为30. 25%,明显高于总体水平(20. 90%)(P<0. 05)。
2.本研究通过PCV2感染猪血清监测结果表明,被检猪场或猪群PCV2抗体场(群体或)阳性率均呈现上升趋势。
3.血清与组织样品中PCV2核酸的检测结果表明抗体检测方法得出的结果和核酸检测得出的结果相接近。
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参考文献(略)

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